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一氧化氮(nitric oxide,no)含量检测试剂盒商品货号:ms1804
英文名称:nitric oxide assay kit
别名:一氧化氮含量检测试剂盒
检测方法:微量法
商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
ms1804-100管/96样 索桥生物 100管/96样 ¥390.00元
产品详细介绍测定意义:
no(nitric oxide,no)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理:
no在体内或水溶液中极易氧化生成 no2-,在酸性条件下,no2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在550nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算no含量。为了排除样品色素等的影响,每个样品需做对照管。
产品说明书
货号:qs1804 规格:50 管/24 样
一氧化氮(nitric oxide,no)含量测定试剂盒说明书 可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
no(nitric oxide,no)广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统 中,特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质,发挥信号传递的作用,是 一种新型的生物信使分子,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理:
no 在体内或水溶液中极易氧化生成 no2-,在酸性条件下,no2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化 合物,进一步与萘基乙烯基二胺偶合,产物在 550nm 处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计 算 no 含量。为了排除样品色素等的影响,每个样品需做对照管。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 50ml×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 6ml×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 6ml×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 12ml×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理:
1. 组织:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1ml 提取液)进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:
按照细胞数量(10^4个):提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1ml 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时 间 3min);然后 10000g,4℃,离心 15min,取上清置于冰上待测。
3. 体液和培养液等其它液态样品:直接测定。
测定步骤和操作表
对照管 测定管
样品(μ l) 400 400
试剂一(μ l) 250
试剂二(μ l) 250
试剂三(μ l) 250 250
混匀,4℃静置 15min,以对照管调零,1ml 玻璃比色皿,测定 a550。
no 含量计算:
标准曲线回归方程为:y= 0.016x -0.0103,r2 = 0. 9986
1、组织样品:
no 含量定义:25℃时,每克样品或每毫克蛋白 15min 生成 1μ mol no2 -,相当于 1μ mol no。 (1)按样本质量计算
no 含量(μ mol/g)=(a550 +0.0103)÷0.016×v 反总÷(v 样÷v 样总×w)×10-3 = 0.14×(a550 +0.0103)÷w
(2)按样本蛋白浓度计算
no 含量(μ mol/mg prot)=(a550 +0.0103)÷0.016×v 反总÷(v 样×cpr)×10-3 = 0.14×(a550 +0.0103)÷cpr
2、其他样品:
no 含量定义:25℃时,每升样品 15min 生成 1μ mol no2-,相当于 1μ mol no。
no 含量(μ mol/l)=(a550 +0.0103)÷0.016×v 反总÷v 样 = 140×(a550 +0.0103)
v 反总:反应总体积,0.9ml;v 样:反应中样品体积,0.4ml;v 样总:加入提取液体积,1ml; w:样品质量,g;cpr:蛋白浓度,mg/ml
注意事项:
1. 试剂盒 2-8℃保存。
2. 尽量使用新鲜样品进行检测,试剂三有腐蚀性,操作时请做好防护措施。
3. 若检测出得 od 值在标准曲线范围外,请将样品进行适当的浓缩或稀释,并在计算公式中除 以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。
4. 低检出限为 0.65μ mol/l。
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